Diabetologia：激活但功能性受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次消失去甲自身免疫反应到消失1M-肾病流行病学病征的重大突破不下在学龄前时代就有很好的描绘，多个去甲自身免疫反应无病征的学龄前当中有70%在肝细胞切换后10年内罹患肾病，而随访15年的学龄前这一比例缩减到84%。相较之下，占流行病学1M-肾病一半以上的M-1M-肾病的发病机制还没获取充分的学妖术研究。

越来越多的人开始运用于分期系统来假设1M-肾病的重大突破：变异在消失多种去甲自身免疫反应时踏入第1先决条件，消失胰岛素持续性时踏入第2先决条件，消失病征时踏入第3先决条件。一些多发去甲自身免疫反应无病征的变异，在1期和2期，重大突破更快，并发展为发病的1M-肾病。我们之前描绘了一小组在首次验证到多种去甲自身免疫反应样本后数10年无肾病的变慢重大突破者，这小组症状人数少，但特征非常完全一致。随后，我们发现去甲自身免疫抗质CD8+T两条路线粒质反应在重大突破更快的症状当中基本不依赖于，但在未来会发病和普遍依赖于的肾病症状当中很较难验证到。这意味著证明了结论，与重大突破症状相较，这些症状自身免疫反应的调节增强。

早期学妖术研究证明了结论，尽管调节性T两条路线粒质(Treg)数量正常，但肾病症状依赖于一些特性局限性，其当中包括对IL-2的反应能力增大。此外，肾病症状当中的波动CD4+T两条路线粒质意味著对调节更具抵抗性，展现出为波动T两条路线粒质的依赖性减弱，自然诱发的Treg和排泄诱发的诱导Treg，以及免疫亲身经历的CD4+T两条路线粒质当中IL-2反应减弱。本学妖术研究的目的是描绘了CD4+调节性T两条路线粒质(Treg)在一小群极更快重大突破者当中的特征，他们的平均岁数为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

作法：BOX学妖术研究是一项以人群相结合的斜向学妖术研究，在21岁以下确诊的症状子女当中健康检查1M-肾病的危险原因。我们之前描绘了长期更快重大突破者的特征，他们保持一致多重去甲自身免疫反应无病征超过10年，但没消失肾病的流行病学病征，慢性或非进行性自身免疫。随后，10名继续保持一致无肾病并愿意提供大量血液样本的更快重大突破者纳入T和B两条路线粒质特性统计分析。在目前为止的学妖术研究当中，8名慢重大突破者(SP小组)，当中位岁数43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的去甲自身免疫反应无病征。所有的旁观者都处于1M-肾病重大突破的1期，尽管一些人随后失去了去甲自身免疫反应对某些免疫的无病征反应，然而，一名症状仍然处于2期数6年，但没消失流行病学病征，一名症状被确诊为肾病，该受试者72岁，在采集物理样本时，其HbA1c升温到53 mmol/mol(7%)，在数据统计分析当中对该NADP进行了单独评核。剥离外周血单个核两条路线粒质(PBMCs)，改用多参数流式两条路线粒质妖术和T两条路线粒质依赖性测试评核NADP当中Treg的频不下、表M-和特性。运用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴别、表征和回归)进行无委派聚类统计分析，评核Treg表M-。

结果：与生活品质NADP相较，来自慢重大突破质的潜意识CD4+T两条路线粒质的委派聚类显示，启动时的潜意识CD4+ Treg频不下缩减，与糖皮质激素诱导的TNFR无关肽(GITR)暗示缩减有关。一名HbA1c升温的症状与重大突破更快者和匹配的对照小组相较，Treg对光略有不同。特性统计新发现，与生活品质NADP相较，来自更快重大突破质的Treg介导的CD4+波动T两条路线粒质依赖性明显毁坏。展现出为对波动CD4+T两条路线粒质CD25和CD134暗示的依赖性缩减。

绘出1 深入的表M-统计分析显示，CD4+Treg亚M-在慢重大突破数据流当中缩减。由FlowSOM转化的Treg过道，聚集在来自所有NADP的活CD4+CD45RA -两条路线粒质上。根据标明物暗示鉴别出10个元簇:潜意识T两条路线粒质_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;潜意识T cell_4;CD49b潜意识T两条路线粒质;HLA-DR + GITR +潜意识T两条路线粒质;内核Treg_1;内核Treg_2;内核Treg_3;和内核Treg_4。(a)运用于9个不同Treg标明转化的10个元簇的MST。每个数据流都有一个一个大(100个一个大)，更大的元一个大(10个元一个大)在数据流小组四周剪裁。每个数据流当中的糕绘出透露单个标明的暗示级别。(b)每个元聚类的热绘出，以显示整质标明暗示。(c, d)为HD小组(c)和SP小组(d)转化绘出，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对来说丰度为每个metacluster箱子两条路线绘出(丰度> 0.05%)确定为HD和SP小组:内核Treg_2 (e),内核Treg_3 (f),内核Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +潜意识T两条路线粒质(h)、潜意识T cell_1(i),潜意识T cell_2 (j),潜意识T cell_3 (k) n d CD49b潜意识T两条路线粒质(l)。粉红色红色都有**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对记号秩验。此键适用于绘出形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

绘出2 运用于CITRUS的预测模M-猜测，Treg频不下的缩减是重大突破更快的徽章。分级相关联(a - f)和柑橘统计分析(g-k)比较SP旁观者和匹配的HD旁观者在CD4+CD45RA−T两条路线粒质上的差异。(a)互补CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群质的都有性绘出。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR暗示进行剥离，模拟FlowSOM群质。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)小组以及NADPSP 606(粉红色)当中CD25+ cd127的频不下简介绘出。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+相关联开集的箱子两条路线绘出;(c) HLA-DRloGITR−(内核Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(内核Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(内核Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+内核T cell)。(g - i)油菜簇棒状由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3暗示强度着色，箭头突出的簇被识别为SP和HD数据流之间的不同。(j)箱子两条路线绘出显示了在SP(蓝点)和HD(灰点)小组当中，CITRUS潜意识Treg_3和Treg_4的相对来说丰度(比例)。(k)直方绘出显示每个簇的表M-(粉红色)和Treg标明相对来说暗示与故事情节暗示(粉红色);上列，内核Treg_3;下面一行，内核Treg_4。故事情节与所有其他簇当中标明的暗示有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对记号秩验

绘出3 与生活品质献血者相较，重大突破更快者潜意识treg的GITR缩减。每个潜意识CD4+T两条路线粒质元簇(潜意识T两条路线粒质_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;CD49b +潜意识T两条路线粒质;HLA-DR + GITR +潜意识T两条路线粒质;内核Treg_2;内核Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)验证每个暗示标明的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)数据流的暗示热绘出(sp606不包括在内)。(c,d)潜意识Treg_4元簇当中所有HD(灰色)、所有SP(粉红色)和SP 606(粉红色)的FlowSOM GITR暗示串联，显示直方绘出(c)和简介绘出(d)。Wilcoxon配对记号秩和验，p< 0.07(粉红色)所有NADP包括，p< 0.05(粉红色)NADPSP 606和匹配的HD不包括在测试当中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs当中GITR暗示，从分级相关联，从所有HD(灰色)、所有SP(粉红色)和SP 606(粉红色)串联，显示直方绘出(e)和简介绘出(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对记号秩验

绘出4 来自更快重大突破的CD4+ treg两条路线粒质压制波动CD4+T两条路线粒质的能力增大。SP小组用粉红色的两条路线和红色透露，HD小组用黑色的两条路线和红色透露，粉红色的两条路线/红色透露NADPsp606。运用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T两条路线粒质进行分选。CD4+CD25−(应答者)被标明为CFSE, Treg按观察的比例滴定。用抗CD3 /28微珠还原两条路线粒质，培育3翌日进行流式两条路线粒质妖术验证。(a-d)与CD4+应答者相对来说应的treg培育(自质)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD应答者培育。(a,b,f) CFSE再生(a,e)和CFSE依赖性倍数(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的依赖性倍数。运用于无病征对照(启动时的号召两条路线粒质仅有treg)计算依赖性倍数。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

绘出5 波动CD4+T两条路线粒质对更快重大突破的T两条路线粒质还原的依赖性更敏感。SP小组用粉红色的两条路线和红色透露，HD小组用黑色的两条路线和红色透露，粉红色的两条路线/红色透露NADPsp606。运用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T两条路线粒质进行分选。CD4+CD25−(应答者)被cfsel标明，treg按观察的比例滴定。用抗CD3 /28微珠还原两条路线粒质，培育3翌日进行流式两条路线粒质妖术(CD25反染)和两条路线粒质因子统计分析。HD Treg与HD、SP或sp606应答者共同培育。(a,b) CFSE再生(a)和CFSE依赖性百分不下(b)。(c,d) CD25依赖性百分不下(c)和CD134依赖性百分不下(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在粗略估计当中的暗示。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们证明了的结论是，来自更快重大突破子的还原潜意识CD4+Treg在GITR暗示当中获取了扩充和丰富，强调了进一步学妖术研究Treg在1M-肾病风险变异当中的一般而言的必要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28