Diabetologia：激活但动态受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次再次出现肝细胞自身炎症到再次出现1型式冠心病临床研究病因的令人满意所部在幼儿一时期就有很好的刻画，多个肝细胞自身炎症乙型式肝炎的幼儿中都有70%在肝脏转换成后10年内患上冠心病，而随访15年的幼儿这一数量增大到84%。相对于之下，占临床研究1型式冠心病一半以上的型式1型式冠心病的确诊必要还没有得到充分的研究课题。

日益多的人开始常用仍须系统来表述1型式冠心病的令人满意：个质在再次出现多种肝细胞自身炎症时转入第1阶段，再次出现血糖异常时转入第2阶段，再次出现病因时转入第3阶段。一些多发肝细胞自身炎症乙型式肝炎的个质，在1期和2期，令人满意较慢，并演进为确诊的1型式冠心病。我们前刻画了一组成员在首次侦测到多种肝细胞自身炎症抽取后数10年无冠心病的较慢令人满意者，这组成员患儿总人数少，但特质相当明确。随后，我们辨认出肝细胞自身复合物特异性CD8+T线粒质催化在令人满意很慢的患儿中都基本不存在，但在近期确诊和由来已久的冠心病患儿中都很难以侦测到。这似乎指出，与令人满意患儿相对于，这些患儿自身免疫催化的调节增强。

早期研究课题指出，尽管调节性T线粒质(Treg)数量经常性，但冠心病患儿存在一些动态缺陷，其中都还包括对IL-2的催化潜能增大。此外，冠心病患儿中都的现象CD4+T线粒质似乎对调节更具抵抗性，表现为现象T线粒质的选择性弱化，自然激发的Treg和质外激发的其会Treg，以及复合物随之而来的CD4+T线粒质中都IL-2催化弱化。本研究课题的意在是刻画了CD4+调节性T线粒质(Treg)在在在极很慢令人满意者中都的特质，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究课题是一项以群体为基础的纵向研究课题，在21岁不限确诊的患儿配偶中都检查和1型式冠心病的致命主因。我们前刻画了长期很慢令人满意者的特质，他们保持一致多重肝细胞自身炎症乙型式肝炎超过10年，但没有再次出现冠心病的临床研究病因，慢性或非顺利进行性自身免疫。随后，10名一直保持一致无冠心病并想要提供大量肠道抽取的很慢令人满意者不属于T和B线粒质动态分析方法。在目前为止的研究课题中都，8名慢令人满意者(SP组成员)，中都位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的肝细胞自身炎症乙型式肝炎。所有的旁观者都西北面1型式冠心病令人满意的1期，尽管一些人随后失去了肝细胞自身炎症对某些复合物的乙型式肝炎催化，然而，一名患儿已经西北面2期数6年，但没有再次出现临床研究病因，一名患儿被诊断为冠心病，该受试者72岁，在采集测试抽取时，其HbA1c升温到53 mmol/mol(7%)，在数据分析方法中都对该NAD顺利进行了单独检验。分离外周血单个连锁反可不线粒质(PBMCs)，采用多参数流式线粒质绝技和T线粒质选择性实验检验NAD中都Treg的阈值、表观式和动态。常用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴别、表征和回归)顺利进行无都由聚类分析方法，检验Treg表观式。

结果：与身质健康NAD相对于，来自慢令人满意质的清醒CD4+T线粒质的都由聚类标示出，激活的清醒CD4+ Treg阈值增大，与低剂量其会的TNFR之外细胞内(GITR)暗示增大有关。一名HbA1c升温的患儿与令人满意很慢者和比如说的印证组成员相对于，Treg谱相同。动态分析方法指出，与身质健康NAD相对于，来自很慢令人满意质的Treg介导的CD4+现象T线粒质选择性明显受损。表现为对现象CD4+T线粒质CD25和CD134暗示的选择性增大。

示意图1 险恶的表观式分析方法标示出，CD4+Treg亚型式在慢令人满意字段中都增大。由FlowSOM作用于的Treg四楼，聚集在来自所有NAD的活CD4+CD45RA -线粒质上。根据上标物暗示鉴别出10个元簇:清醒T线粒质_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;清醒T cell_4;CD49b清醒T线粒质;HLA-DR + GITR +清醒T线粒质;寄存器Treg_1;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;和寄存器Treg_4。(a)常用9个完全相同Treg上标作用于的10个元簇的MST。每个数据流值得一提的是一个炮兵部队(100个炮兵部队)，更大的元炮兵部队(10个元炮兵部队)在数据流组成员一处装裱。每个数据流中都的饼示意图表示单个上标的暗示级别。(b)每个元聚类的热示意图，以标示出结构上上标暗示。(c, d)为HD组成员(c)和SP组成员(d)作用于示意图，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对同位素为每个metacluster装入线或示意图(同位素> 0.05%)确定为HD和SP组成员:寄存器Treg_2 (e),寄存器Treg_3 (f),寄存器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +清醒T线粒质(h)、清醒T cell_1(i),清醒T cell_2 (j),清醒T cell_3 (k) n d CD49b清醒T线粒质(l)。蓝色左上方值得一提的是这些年来SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于示意图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

示意图2 常用CITRUS的预测模型式证实，Treg阈值的增大是令人满意很慢的标志。分级依赖型式(a - f)和柑橘分析方法(g-k)相对SP旁观者和比如说的HD旁观者在CD4+CD45RA−T线粒质上的关联。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群质的值得一提的是性示意图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR暗示顺利进行分离，模拟FlowSOM群质。(b) HD(黑点)和SP(虎纹)组成员以及NADSP 606(蓝色)中都CD25+ cd127的阈值汇总示意图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+依赖型式三子集的装入线或示意图;(c) HLA-DRloGITR−(寄存器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(寄存器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(寄存器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+寄存器T cell)。(g - i)棉花簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3暗示其中心示意图例，对角出彩的簇被识别为SP和HD字段之间的完全相同。(j)装入线或示意图标示出了在SP(虎纹)和HD(灰点)组成员中都，CITRUS清醒Treg_3和Treg_4的相对同位素(数量)。(k)直方示意图标示出每个簇的表观式(粉红色)和Treg上标相对暗示与时代背景暗示(粉红色);上列，寄存器Treg_3;下面恰巧，寄存器Treg_4。时代背景与所有其他簇中都上标的暗示有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

示意图3 与身质健康献血者相对于，令人满意很慢者清醒treg的GITR增大。每个清醒CD4+T线粒质元簇(清醒T线粒质_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;CD49b +清醒T线粒质;HLA-DR + GITR +清醒T线粒质;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)侦测每个暗示上标的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)字段的暗示热示意图(sp606不还包括在内)。(c,d)清醒Treg_4元簇中都所有HD(棕色)、所有SP(粉红色)和SP 606(蓝色)的FlowSOM GITR暗示串联，标示出直方示意图(c)和汇总示意图(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(蓝色)所有NAD还包括，p< 0.05(粉红色)NADSP 606和比如说的HD不还包括在测试中都。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中都GITR暗示，从分级依赖型式，从所有HD(棕色)、所有SP(粉红色)和SP 606(蓝色)串联，标示出直方示意图(e)和汇总示意图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

示意图4 来自很慢令人满意的CD4+ treg线粒质控制现象CD4+T线粒质的潜能增大。SP组成员用粉红色的线或和左上方表示，HD组成员用银色的线或和左上方表示，蓝色的线或/左上方表示NADsp606。常用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T线粒质顺利进行分选。CD4+CD25−(；也者)被上标为CFSE, Treg按辨别的数量硫酸铜。用抗CD3 /28微珠诱导线粒质，指导3天后顺利进行流式线粒质绝技侦测。(a-d)与CD4+；也者相对可不的treg指导(complex)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD；也者指导。(a,b,f) CFSE选择性(a,e)和CFSE选择性总和(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的选择性总和。常用乙型式肝炎印证(激活的响可不线粒质不含treg)测算选择性总和。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析方法。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相对测试

示意图5 现象CD4+T线粒质对很慢令人满意的T线粒质诱导的选择性更引人注意。SP组成员用粉红色的线或和左上方表示，HD组成员用银色的线或和左上方表示，蓝色的线或/左上方表示NADsp606。常用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T线粒质顺利进行分选。CD4+CD25−(；也者)被cfsel上标，treg按辨别的数量硫酸铜。用抗CD3 /28微珠诱导线粒质，指导3天后顺利进行流式线粒质绝技(CD25反染)和线粒质因三子分析方法。HD Treg与HD、SP或sp606；也者协力指导。(a,b) CFSE选择性(a)和CFSE选择性百分所部(b)。(c,d) CD25选择性百分所部(c)和CD134选择性百分所部(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共指导中都的暗示。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析方法。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相对测试

论据：我们得出的论据是，来自很慢令人满意三子的诱导清醒CD4+Treg在GITR暗示中都得到了扩张和丰富，强调了进一步研究课题Treg在1型式冠心病可能会个质中都的异质性的必要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28