Diabetologia：介导但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次成现肾脏自身抗本体到成现1型号白血病流行病学症状的成果率在青多于年时期就有很好的刻画，多个肾脏自身抗本体阴性的青多于年中会有70%在血清转换后10在短期内身患白血病，而随访15年的青多于年这一%-增加到84%。来得之下，占流行病学1型号白血病一半以上的型号1型号白血病的得病机制还没有取得充分的深入研究。

日益多的人开始用于依此系统来定义1型号白血病的成果：生物本体在成现多种肾脏自身抗本体时进入第1期中，成现血糖异常时进入第2期中，成现症状时进入第3期中。一些多发肾脏自身抗本体阴性的生物本体，在1期和2期，成果较慢，并拓展为得病的1型号白血病。我们之前刻画了除此以外在首次检测到多种肾脏自身抗本体抽取后至多于10年无白血病的极快成果者，这分组病患人数多于，但特性极为明确。随后，我们断定肾脏自身抗原特异性CD8+T两条路线粒本体质三子化在成果加速的病患中会基本不发挥作用，但在早先得病和长期发挥作用的白血病病患中会很容易检测到。这不太可能得出结论，与成果病患来得，这些病患诱发质三子化的平衡增强。

早期深入研究得出结论，尽管平衡性T两条路线粒本体(Treg)数量正常，但白血病病患发挥作用一些新功能缺陷，其中会包括对IL-2的质三子化能力下降。此外，白血病病患中会的畸变CD4+T两条路线粒本体不太可能对平衡格外具抵抗性，发挥为畸变T两条路线粒本体的消除增强，自然产生的Treg和胃产生的消除Treg，以及抗原经历的CD4+T两条路线粒本体中会IL-2质三子化增强。本深入研究的目的是刻画了CD4+平衡性T两条路线粒本体(Treg)在一小群极加速成果者中会的特性，他们的平均比率为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX深入研究是一项以人群进一步将的平行深入研究，在21岁此表确诊的病患亲人中会定期检查1型号白血病的脆弱因素。我们之前刻画了长期加速成果者的特性，他们保持多重肾脏自身抗本体阴性少于10年，但没有成现白血病的流行病学症状，慢性或非同步进行性诱发。随后，10名继续保持无白血病并愿意提供大量血液循环抽取的加速成果者归入T和B两条路线粒本体新功能深入研究。在目前的深入研究中会，8名慢成果者(SP分组)，中会位比率43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的肾脏自身抗本体阴性。所有的大多数人都位处1型号白血病成果的1期，尽管一些人随后失去了肾脏自身抗本体对某些抗原的阴性质三子化，然而，一名病患已经位处2期至多于6年，但没有成现流行病学症状，一名病患被诊断为白血病，该实验者72岁，在采集实验抽取时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据深入研究中会对该供本体同步进行了单独审核反应。转化外周血单个核反应两条路线粒本体(PBMCs)，采用多常量流式两条路线粒本体术和T两条路线粒本体消除次测试审核反应供本体中会Treg的Hz、发挥型号和新功能。用于FlowSOM和CITRUS(聚类比对、连续性和紧接)同步进行无监督聚类深入研究，审核反应Treg发挥型号。

结果：与肥胖症供本体来得，来自慢成果本体的思绪CD4+T两条路线粒本体的监督聚类显示，激活的思绪CD4+ TregHz增加，与糖皮质激素消除的TNFR相关蛋白(GITR)解读增加有关。一名HbA1c升高的病患与成果加速者和冗余的折衷分组来得，Treg谱各有不同。新功能深入研究得出结论，与肥胖症供本体来得，来自加速成果本体的Treg介导的CD4+畸变T两条路线粒本体消除显着毁损。发挥为对畸变CD4+T两条路线粒本体CD25和CD134解读的消除增加。

示意图1 深入的发挥型号深入研究显示，CD4+Treg甲型号在慢成果队列中会增加。由FlowSOM分解成的Treg室，聚集在来自所有供本体的活CD4+CD45RA -两条路线粒本体上。根据上标物解读比对成10个元簇:思绪T两条路线粒本体_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;思绪T cell_4;CD49b思绪T两条路线粒本体;HLA-DR + GITR +思绪T两条路线粒本体;缓存Treg_1;缓存Treg_2;缓存Treg_3;和缓存Treg_4。(a)用于9个不同Treg上标分解成的10个元簇的MST。每个数据流推选一个协同(100个协同)，格外大的元协同(10个元协同)在数据流分组周边上色。每个数据流中会的饼示意图问到单个上标的解读分级。(b)每个元聚类的热示意图，以显示整本体上标解读。(c, d)为HD分组(c)和SP分组(d)分解成示意图，以及FlowSOM标记的每个元簇的覆盖层。(e-l)相较丰度为每个metacluster盒两条路线示意图(丰度> 0.05%)确定为HD和SP分组:缓存Treg_2 (e),缓存Treg_3 (f),缓存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +思绪T两条路线粒本体(h)、思绪T cell_1(i),思绪T cell_2 (j),思绪T cell_3 (k) n d CD49b思绪T两条路线粒本体(l)。粉红色左上方推选ACSSP 606。**p< 0.01, Wilcoxon选取符号秩检验。此键适用于示意图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

示意图2 用于CITRUS的预测模型号证明，TregHz的增加是成果加速的标志。分级门控(a - f)和柑橘深入研究(g-k)比较SP大多数人和冗余的HD大多数人在CD4+CD45RA−T两条路线粒本体上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会性的推选性示意图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR解读同步进行转化，虚拟FlowSOM社会性。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)分组以及供本体SP 606(粉红色)中会CD25+ cd127的Hz综合示意图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控三同构的盒两条路线示意图;(c) HLA-DRloGITR−(缓存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(缓存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(缓存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+缓存T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3解读气压图例，箭头突成的簇被标记为SP和HD队列之间的不同。(j)盒两条路线示意图显示了在SP(蓝点)和HD(灰点)分组中会，CITRUS思绪Treg_3和Treg_4的相较丰度(%-)。(k)直方示意图显示每个簇的发挥型号(粉红色)和Treg上标相较解读与着重解读(粉红色);上列，缓存Treg_3;上面一行，缓存Treg_4。着重与所有其他簇中会上标的解读有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon选取符号秩检验

示意图3 与肥胖症献血者来得，成果加速者思绪treg的GITR增加。每个思绪CD4+T两条路线粒本体元簇(思绪T两条路线粒本体_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;CD49b +思绪T两条路线粒本体;HLA-DR + GITR +思绪T两条路线粒本体;缓存Treg_2;缓存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个解读上标的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的解读热示意图(sp606不包括在内)。(c,d)思绪Treg_4元簇中会所有HD(黄色)、所有SP(粉红色)和SP 606(粉红色)的FlowSOM GITR解读分组合成，显示直方示意图(c)和综合示意图(d)。Wilcoxon选取符号秩和检验，p< 0.07(粉红色)所有供本体包括，p< 0.05(粉红色)供本体SP 606和冗余的HD不包括在测试中会。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中会GITR解读，从分级门控，从所有HD(黄色)、所有SP(粉红色)和SP 606(粉红色)分组合成，显示直方示意图(e)和综合示意图(f) *p< 0.05, Wilcoxon选取符号秩检验

示意图4 来自加速成果的CD4+ treg两条路线粒本体控制畸变CD4+T两条路线粒本体的能力下降。SP分组用粉红色的两条路线和左上方问到，HD分组用红色的两条路线和左上方问到，粉红色的两条路线/左上方问到供本体sp606。用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T两条路线粒本体同步进行分选。CD4+CD25−(此番者)被上标为CFSE, Treg按掩蔽的%-溶液。用抗CD3 /28微珠酪氨酸两条路线粒本体，培植3同一天同步进行流式两条路线粒本体术检测。(a-d)与CD4+此番者相较应的treg培植(自本体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD此番者培植。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE消除百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的消除百分比。用于阴性折衷(激活的声势浩大两条路线粒本体都有treg)测算消除百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差深入研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

示意图5 畸变CD4+T两条路线粒本体对加速成果的T两条路线粒本体酪氨酸的消除格外敏感。SP分组用粉红色的两条路线和左上方问到，HD分组用红色的两条路线和左上方问到，粉红色的两条路线/左上方问到供本体sp606。用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T两条路线粒本体同步进行分选。CD4+CD25−(此番者)被cfsel上标，treg按掩蔽的%-溶液。用抗CD3 /28微珠酪氨酸两条路线粒本体，培植3同一天同步进行流式两条路线粒本体术(CD25反染)和两条路线粒本体因三子深入研究。HD Treg与HD、SP或sp606此番者共同培植。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE消除百分率(b)。(c,d) CD25消除百分率(c)和CD134消除百分率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培植中会的解读。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差深入研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

得成结论：我们得成的得成结论是，来自加速成果三子的酪氨酸思绪CD4+Treg在GITR解读中会取得了扩展和丰富，务实了进一步深入研究Treg在1型号白血病可能性生物本体中会的异质性的前提。

书名成处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28